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EMSA

實驗意義

EMSA是轉錄因子研究的經典方法。今年來基因分子生物學研究領域的趨勢之一是從基因結構和功能分析轉向基因順式作用元件和反式作用因子(轉錄因子)及其轉錄調控機制上,對基因轉錄調控的研究是表觀遺傳學和功能基因組學的熱點。


實驗原理及流程

凝膠遷移或電泳遷移率檢測(Electrophoretic Mobility Shift Assay, EMSA)是一種檢測DNA序列和蛋白質相互作用的技術。將純化的蛋白與細胞粗提液以及同位素標記的DNA或者RNA探針一同孵育,然后通過非變性的聚丙烯凝膠電泳分離核酸-蛋白質復合物以及未結合的探針,核酸-蛋白質復合物(DNA-蛋白質復合物或RNA-蛋白質復合物)比未結合的探針遷移速度慢,從而檢測DNA/RNA序列與蛋白質的相互作用。


結果展示[1,2]

 emsa.png


實驗完成周期及交付標準

1. 實驗周期:4-7周

2. 交付標準:X光片、實驗報告(實驗步驟、試劑、儀器)

 

需確認的信息

1. 目的基因與蛋白信息

2. 樣本種屬及類型

3. 是否提供抗體


參考文獻

[1] Miller D E , Patel Z H , Lu X , et al. Screening for Functional Non-coding Genetic Variants Using Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA) and DNA-affinity Precipitation Assay (DAPA)[J]. Journal of Visualized Experiments Jove, 2016, 2016(114).

[2] Parés-Matos EI. Electrophoretic Mobility-Shift and Super-Shift Assays for Studies and Characterization of Protein–DNA Complexes[M]// Gene Regulation. Humana Press, 2013.

[3] Bak G , Han K , Kim K , et al. Electrophoretic mobility shift assay of RNA-RNA complexes.[J]. Methods in Molecular Biology, 2015, 1240:153.


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