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蛋白相互作用分析

蛋白相互作用分析:蛋白質是細胞活性和功能的執行者,且蛋白質是依靠蛋白間相互作用執行功能的,因而研究蛋白的相互作用對于研究細胞活性和功能、解釋生命過程和現象具有重要意義。

 

實驗意義

1.蛋白相互作用分析是研究蛋白功能的重要工具。

2.蛋白相互作用出現異常會影響正常細胞的活性和功能,導致許多疾病的發生,比如神經退行性疾病和惡性腫瘤等,這對相關疾病的病理診斷以及臨床治療研究具有重要意義。

 

實驗原理

1. GST蛋白的表達:選擇合適的蛋白表達系統表達帶GST標簽的融合蛋白;

2. 制備誘餌蛋白-GST融合蛋白裂解液;

3. 通過谷胱甘肽親和樹脂柱富集誘餌蛋白-GST融合蛋白,洗脫未結合的雜蛋白;

4. 目標蛋白也可以通過蛋白表達系統進行表達純化;

5. 將含有目標蛋白的混合物加入柱中與親和固定在柱上的誘餌蛋白相互作用從而被吸附,洗脫未結合的雜蛋白;

6.用谷胱甘肽洗脫緩沖液將蛋白相互作用復合物洗脫下來;

7. 通過SDS-PAGE和Western Blot或質譜進行檢測。

 

結果展示

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實驗周期及交付標準

1. 實驗周期:3-5周

2. 交付標準:WB檢測結果、載體設計報告、實驗報告(試劑、耗材、實驗步驟)、原始數據等

 

需確認信息

1. 目的蛋白及信息

2. 樣本種屬及類型

3.是否提供一抗


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