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蛋白表達純化

蛋白的表達:是指通過模式生物來表達目的的外源基因蛋白的一種現代分子生物學技術,表達系統主要是由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成,從而實現外源基因通過載體在宿主中的表達。

 

實驗意義

1.蛋白表達技術在基因工程技術中占有核心地位,在實際生產中具有重要的應用意義。

2.蛋白表達技術已經廣泛應用于生物學各個具體領域,特別是體內的功能研究和蛋白質的大規模生產都需要應用。

實驗原理

1. 獲得目的基因;

2. 構建合適的載體(注意根據目的基因和純化方式的選擇等多方面因素選擇融合標簽);

3. 將目的基因插入表達載體中,并通過測序進行驗證;

4. 載體轉化進入大腸桿菌等宿主菌后,測序篩選挑單克隆菌落進行擴大培養,IPTG誘導靶蛋白的表達;

5. 破碎菌體后提取蛋白,并通過融合標簽純化得到靶蛋白。

 

分類

1. 真核表達系統:真核表達系統主要有昆蟲表達系統、酵母表達系統和哺乳動物細胞表達,其中酵母表達和哺乳動物細胞較為常見。

2. 無細胞體外表達系統,又稱為體外翻譯系統,通過模擬細胞的生命活動和現象來重現胞內蛋白的轉錄和翻譯過程。

 

結果展示

原核表達系統

純化1.png


真核表達系統

  純化2.png


無細胞體外表達系統

純化3.png

實驗周期及交付標準

1. 實驗周期:4-6周

2. 交付標準:目的蛋白、實驗報告(試劑、耗材、實驗步驟)、原始數據等。

 

需確認的信息

1. 表達系統采取方式。

2. 純化步驟選擇。

 

參考文獻

[1] Yu X , Abdullahi A Y , Wu S , et al. Prokaryotic Expression of α-13 Giardin Gene and Its Intracellular Localization in Giardia lamblia[J]. Biomed Research International, 2017, 2017:1603264.

[2] Anwised P , Jangpromma N , Temsiripong T , et al. Cloning, Expression, and Characterization of Siamese Crocodile (Crocodylus siamensis) Hemoglobin from Escherichia coli and Pichia pastoris[J]. Protein Journal, 2016, 35(4):256-268.

[3] Krinsky N , Kaduri M , Shainskyroitman J , et al. A Simple and Rapid Method for Preparing a Cell-Free Bacterial Lysate for Protein Synthesis[J]. Plos One, 2016, 11(10):e0165137.

 

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