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人胰腺癌細胞 MIA PaCa-2

價 格¥1199
產品編號:GL0018
細胞數量:1*10^6
組織來源
細胞種屬:人源或者鼠源等其他物種
培養基:90%DMEM+10%FBS+1%雙抗
形態特征:上皮細胞樣
傳代方法:1:2傳代
培養條件
細胞描述:儲存條件:液氮 保存條件:4℃保存一年,-20℃長期保存
細胞凍存:90%血清+10%DMSO,現配現用
細胞運輸:干冰(第二代培養末期液氮凍存)

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產品詳情

造成實驗室細胞污染常見情況總結:

細胞培養中最常見污染的是細菌、真菌和支原體污染。細胞一旦污染,大多數較難處理。那么,哪些情況我們不注意的話就會造成細胞污染呢?我們根據常見細胞培養實驗分析總結下。

    1) 為節省時間,有人已經用超凈臺四個多小時,不開紫外滅菌30min,酒精擦拭后直接開始試驗;

    2) 器材或者溶液很久沒用,未檢測是否污染而直接使用;離心管多次使用,槍頭為了方便交叉使用;

    3) 超凈臺不點酒精燈;點了酒精燈放在右上角,而你在左下角做試驗;

    4) 不帶手套,徒手操作;

    5) 細胞培養間配備槍式移液器、手術器械、離心機、冰箱等專用儀器設備以及專用的實驗服和拖鞋,未定期消毒。專用物品被帶出傳代細胞使用。培養細胞過程中使用的所有實驗用具,如移液管、一次性槍頭、一次性塑料離心管、凍存管等未按要求滅菌使用(通常需121°C高壓滅菌20分鐘后37%烤干備用)。超凈臺和桌面,東西太多太亂:超凈臺不是儲物箱,什么培養皿、各種規格的板子、槍頭就不要堆在超凈臺!這樣就會有許多紫外線顧不到的衛生死角。傳代細胞其他的桌面,切忌東西堆積如山,不要將酒精棉球、標簽紙、牛皮紙買來后全部堆在傳代細胞!一不小心“飄”進你的細胞培養板里,細胞就會養的不好,啥時候死了都不知道!【培養箱太久沒清潔】細胞污染了,并非直接扔了培養皿就不管了,首先你還得看看這個恒溫培養箱里其他培養皿或孔板里的細胞是否污染,如果有而且好幾個板子都有類似的污染塊,那很可能是培養箱中的水或者空氣污染了,得給培養箱做個大掃除,重新酒精消毒,照紫外;孵箱里的水,水沒了要記得加,還得記得十天半個月的就用酒精擦擦托盤。【傳代細胞人多口雜,難管理】在傳代細胞這種衛生要求高,人多了,不確定因素多了,難以保證試驗在無菌條件下操作。出入試驗室,實驗服當風衣穿,不扣紐扣,不戴鞋套,就容易造成細胞污染;超凈臺做實驗時,喜歡說話聊著做試驗,要是還不帶口罩,里面就有很多細菌等著去攻擊你的細胞呢!


解凍細胞常見實驗問題分析及推薦解決方法:在解凍凍存細胞時,發現會出現存活率低、大量細胞碎片及生長緩慢等問題,究竟是什么原因導致,我們該怎么進行解決?以下是國內外細胞培養專家針對解凍細胞實驗問題,總結的一些解決方案!出現低存活率的可能原因及推薦解決方案如下:1)解凍過程中細胞裂解,推薦的解決方案:可預期到一定量的細胞死亡,因此細胞的濃度應足夠高,考慮到這一損失。起始濃度為1*10(6)至1*10(7)細胞/毫升;2)解凍過程中的問題,推薦的解決方案:在-70℃至-80℃下保存冷凍的培養物,保存時間為1-5天,但這不是保存的方法。在37℃充分解凍后應立即開始培養;3)對冷凍液過敏,推薦的解決方案:A.完全或部分更換培養基,減少培養基中冷凍液的量。在24小時后更換培養液體可全部去除冷凍液。B.留出更多時間供培養物恢復。有時細胞需要幾周時間才能形成單層或密集的懸浮物,取決于冷凍時細胞的年齡或傳代次數或在生長階段中的位置。冷凍的最佳條件在對數期;4)被冷凍的原種細胞的年齡或冷凍時培養物的年齡,推薦的解決方案:解凍最近冷凍的細胞。細胞處于冷凍狀態的時間越長,存活率越低。檢查冷凍細胞的時間和方法。在冷凍時細胞應處于對數期。



細胞產品包裝:復蘇形式:T25培養瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支)
MIA PaCa-2細胞系 復蘇培養更專注


細胞背景資料:詳見相關文獻介紹


【凍存細胞操作】

    1)選對數增生期細胞(證明無支原體污染),在凍存前1d換液;

    2)按常規方法把培養細胞制備成懸液,計數,使細胞密度達5×10(7)/ml左右密度,離心,去上清;

    3)加入配制好的凍存液(培養液6.8ml,小牛血清2ml,DMSO 1ml,5.6%NaHCO3 0.1ml),按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。凍存細胞時培養液中加入保護劑10%二甲基亞砜(DMSO) 或甘油,可使冰點降低,使細胞內水分在凍結前透出細胞外;

    4)分裝于無菌凍存管中,每管加1.5m懸液;

    5)旋好凍存管并仔細檢查,一定要蓋緊,做好標記;6)凍存:在特殊的儀器或簡易的液氮容器中,按-1℃/min的速度,在30~40min時間內,下降到液氮表面,再停30min后,直接投入液氮中。要適當掌握下降冷凍速度,過快能影響細胞內水分透出,太慢則促進冰晶形成。操作時應戴防護眼鏡和手套,以免液氮凍傷。


【復蘇細胞操作】

    1)從罐中取出凍存管;

    2)迅速放入36℃~37℃水浴,不時搖動,使其急速融化,30~60s內完成;

    3)凍存管用70%酒精擦拭消毒后,打開蓋子,用吸管將細胞懸液注入離心管中,再滴加10ml培養液;

    4)低速離心(500~1000r/min) 5min,去上清后再用培養液洗一次;

    5)用培養液適當稀釋后,裝入培養瓶37℃培養,次日更換一次培養液后,繼續培養。以后仍按常規進行培養。凍存細胞數量要充分,密度應達到10(7)/ml,在融后稀釋20倍時,仍能保持5×10(5)/ml數量。


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