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石蠟/冰凍切片免疫組化

免疫組化

應用免疫學基本原理,通過標記的特異性抗體(或抗原)對組織內抗原(或抗體)的分別進行組織和細胞原位檢測,從而進行定位、定性及相對定量的研究。


實驗意義

1. 免疫組織化學可應用于惡性腫瘤的病理診斷和科研工作。

2. 可與組織化學染色方法的形態學診斷相結合,提高疑難腫瘤的鑒別診斷的準確率,并為腫瘤進行進一步的病理分型。

3. 指導和提供臨床治療方案的選擇。


實驗步驟

1. 石蠟切片免疫組化:


①67℃烘箱烘片2小時,常規脫蠟至水,用pH 7.4的PBS沖洗三次,每次3 min;

②將切片置于沸騰的檸檬酸鹽緩沖液中中檔微波處理10 min,蒸餾水沖洗三次,PBS沖洗三次,每次3 min;

③3%H2O2室溫孵育10 min阻斷內源性過氧化物酶的活性,PBS沖洗三次,每次3 min;

④5~10%正常山羊血清(PBS稀釋)封閉,室溫孵育10 min,吸去血清后滴加稀釋至適當比例的一抗,37℃孵育1-2 h或者4℃孵育過夜;

⑤PBS沖洗三次,每次3 min;⑤滴加稀釋至適當比例的帶標記二抗,37℃孵育10~30 min,PBS沖洗三次,每次3 min;

⑥滴加適當比例稀釋的辣根酶標記物工作液,37℃孵育10~30 min,PBS沖洗三次,每次3 min;

⑦顯色劑顯色,自來水充分沖洗,復染細胞核,酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固。


2. 冰凍切片免疫組化:


①新鮮組織立即在恒冷冰凍切片機內切片,厚度為5~6 μm;

②載玻片可不打底,裱片后立刻用電吹風吹干;

③染色前需用冷丙酮4℃固定10~20 min;

④PBS洗2次,每次5 min;

⑤3%H2O2滅活內源性過氧化物酶20 min,需避光處理;

⑥后續血清封閉與抗體孵育步驟與石蠟切片相似,最后脫水透明封片進行觀察。


結果展示

1. 石蠟切片免疫組化[1]


免疫組化1.png


2. 冰凍切片免疫組化[2]

免疫組化2.png


實驗完成周期及交付標準

1. 實驗周期:1-2周

2. 交付標準:蠟塊、切片、染色圖片、灰度值分析、柱狀圖、實驗報告(實驗步驟、試劑、儀器等)


需確認的信息

1. 樣本的種屬?

2. 樣本類型(固定的組織or蠟塊or切片)

3. 檢測的目的蛋白

4. 是否提供一抗,公司可代購

5. 陽性率或者半定量分析要求

6. 拍照要求


文獻參考 

[1] Jensen K , Rikke KrusenstjernaHafstr?m, Lohse J , et al. A novel quantitative immunohistochemistry method for precise protein measurements directly in formalin-fixed, paraffin-embedded specimens: analytical performance measuring HER2[J]. Modern Pathology An Official Journal of the United States & Canadian Academy of Pathology Inc, 2016, 30(2):180.

[2] Shi, ShanRong, Liu, et al. Evaluation of the Value of Frozen Tissue Section Used as "Golden Standard" for Immunohistochemistry[J]. American Journal of Clinical Pathology, 2008, 129(3):358.


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