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細胞克隆

軟瓊脂克隆:克隆形成率反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀


實驗步驟

1. 獲取樣本,培養細胞,

2. 調整細胞懸液密度為1×103個/ml細胞。

3. 制備底層瓊脂,完全溶化的5%瓊脂和 37℃ 左右預溫的新鮮完全培養液以1:9比例在 40℃ 均勻混合,加入培養皿(直徑 60mm )中,每皿含0.5%瓊脂培養基2ml,室溫下瓊脂完全凝固。

4. 制備上層瓊脂,37℃ 密度每皿含200個的細胞懸液1.5ml移入小燒杯中,加入 40℃ 、5%瓊脂等體積混勻,即成0.25%半固體瓊脂培養基。配好的半固體瓊脂培養基立即加入鋪有底層瓊脂的培養皿中,室溫下瓊脂凝固。 37℃ 、5%CO2靜置培養2-3周。

5. 當培養皿中出現肉眼可見克隆時,終止培養,棄去培養液,PBS液小心浸洗2次,空氣干燥。甲醇固定15分鐘,棄甲醇后空氣干燥。用Giemsa染液染色10分鐘,流水緩慢洗去染液,空氣干燥。


結果展示

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實驗周期及交付標準

1. 實驗周期:1-2周

2. 交付標準:克隆形成圖片、計數結果、柱狀圖、實驗報告(實驗步驟、試劑、儀器等)

 

細胞克隆化其他方法

1. 稀釋鋪板方法

2. 飼養層克隆法

3. 毛細管克隆法

4. 熒光激活分選法


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