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細胞培養

細胞培養

從體內組織取出細胞,在體外培養使其生長繁殖并維持其結構和功能的一種培養技術。


細胞培養的意義

1. 是細胞生物學研究中最基礎、最基本的一項技術,可以用來進行藥物篩選、疫苗生產、抗體制備等。

2. 可以模擬復雜的生命活動機制   in vitro(體外)-in vivo(體內)。最主要是大部分實驗無法把活體作為實驗對象,因此需要首先在細胞水平進行研究,再從體內進行驗證。

3. 可以通過細胞培養獲得大量實驗細胞,進而研究實驗細胞的信號轉導、物質及能量代謝以及細胞的增殖凋亡等。

 

常見細胞培養類型

1. 原代細胞培養:

從生物體組織、器官中分離得到的原代細胞,通過機械方法、酶、螯合劑(如EDTA)來處理分散成單細胞,置于培養基中進行培養,注意原代培養的貼壁依賴性細胞需要使用促進貼壁的包被培養皿(如使用多聚賴氨酸),從而幫助細胞貼壁,促進細胞的生長和增殖。。


2. 貼壁細胞培養:

貼壁培養主要適用于貼壁依賴性的細胞,細胞貼附于培養皿的表面生長,當生長鋪滿平面時會發生接觸抑制,此時就需要對細胞進行傳代處理。傳代方式也是采用酶消化法,可根據具體需要,選擇是否使用多聚賴氨酸鋪皿來促進細胞貼壁生長。


3. 懸浮細胞培養:

懸浮培養主要適用于非貼壁依賴性的細胞,細胞或者細胞的聚集體懸浮于培養液中,懸浮培養是一種大規模細胞培養的理想方式。懸浮培養需要保持良好的分散狀態,因此需要再振蕩的條件下培養,形成分散良好的懸浮培養物。當細胞培養至一定密度時需進行傳代,傳代時需去除較大的細胞聚集體和殘渣物。


4. 干細胞的培養:

干細胞具有自我更新和自我維持的能力,可以無限次地進行增殖分裂,是一類尚未充分分化多潛能的細胞,在一定條件下,可以分化成多種功能細胞。根據干細胞的類型選擇貼壁培養或懸浮培養的方式,通常干細胞生長于鋪有輔助附著的細胞外基質的成分(如明膠、基質膠或膠原蛋白等)或是MEF飼養層的培養皿上,除了這類傳統的二維培養技術,還可以使用三維的培養技術來模擬生物機體內環境,可根據不同的細胞類型來進行培養條件的優化和分析。

 

結果展示

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大鼠神經元原代細胞                                       人臍靜脈內皮細胞

 

實驗完成周期及交付標準

1. 實驗周期:一般細胞培養時間為2-5天,特殊細胞培養根據細胞說明書而定。原代細胞需要購買動物提取組織進行分離和消化,一般時間為1-2周。

2. 交付標準:細胞圖片、實驗報告(試劑、耗材、實驗步驟)

 

需確認的信息

1. 需要培養細胞的具體名稱?

2. 客戶是否提供細胞還是我方代購?

3. 細胞培養只是為本實驗獲得標本,我們需要具體對細胞進行哪些具體生物學功能檢測?如增殖、凋亡、遷移、侵襲等。

 

文獻參考

[1] https://www.atcc.org/,細胞培養說明書ATCC網址。

[2] Autophagy modulates temozolomide-induced cell death in alveolar Rhabdomyosarcoma cells

[3] Erlotinib in Previously Treated Non–Small-Cell Lung Cancer 

 

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