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iTRAQ&TMT

同位素標記定量

iTRAQ(isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation)&TMT(Tandem Mass Tags)分別由AB Sciex公司和Thermo公司研發的多肽體外標記定量技術,利用多種同位素試劑標記蛋白多肽N末端或者賴氨酸側鏈基團,不同分子量的試劑對不同來源的樣品進行標記從而實現不同樣品間蛋白質組的比較。


iTRAQ實驗步驟

1. 樣品準備:將待測樣品進行定量計算出樣品蛋白濃度;

2. 蛋白還原烷基化及酶解:每組樣品各取100μg按照iTRAQ試劑盒要求進行處理,使用測序級胰蛋白酶溶液酶解后,超濾管離心收集酶解肽段;

3. iTRAQ標記:將iTRAQ試劑平衡到室溫,用150μL異丙醇溶解,取酶解肽段加入iTRAQ試劑后室溫反應2 h,加入水終止反應,等量混合不同組樣品,真空冷凍干燥樣品;

4. LC-MS-MS分析:使用Thermo的Q-Exactive Orbitrap進行串聯質譜鑒定。

5. 數據處理及生信分析


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結果展示

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全局分析聚類熱圖


 itraq2.png


TOP10 的蛋白數目統計分析

 

實驗周期及交付標準

1. 實驗周期:4-6周

2. 交付標準:蛋白定量結果、鑒定結果、質譜原始數據、生信分析結果(GO分析、KEGG分析等等)

 

需確認的信息

1. 樣本的種屬

2. 樣本的類型(組織or細胞or血液)

3. 樣本的數量及分組

4. 分析要求

 

參考文獻

[1] Xu X , Zhu Q , Zhang R , et al. ITRAQ-Based Proteomics Analysis of Acute Lung Injury Induced by Oleic Acid in Mice[J]. Cellular Physiology and Biochemistry, 2017:1949-1964.

[2] Qu Z , Gao F , Li L , et al. Label-Free Quantitative Proteomic Analysis of Differentially Expressed Membrane Proteins of Pulmonary Alveolar Macrophages Infected with Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus and Its Attenuated Strain[J]. PROTEOMICS, 2017:1700101.


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