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qPCR

qPCR

即實時熒光定量PCR,就是在PCR的擴增過程中,通過熒光的信號,對PCR的進程進行實時的定性、定量檢測,檢測方式有SYBR Green染料法和Taqman探針法兩種方式。

 

探針法與染料法的優缺點

1. 探針法通過探針可以增加反應收集信號的特異性,只有探針結合的片段上發生擴增才能收集到信號,能夠用多重體系反應的方法,能夠預測和提前進行反應條件的優化,缺點是要合成探針,成本高,周期長。

2. 染料法經濟實惠,可以做溶解曲線,分析全部PCR產物的TM值,缺點就是特異性沒有探針法好。

 

結果展示

QPCR1.png


QPCR2.png

QPCR3.png


實驗周期及交付標準

1. SYBR Green染料法

實驗周期:1-2周

交付標準:擴增曲線、溶解曲線、Ct值、引物、實驗報告(實驗步驟、試劑、儀器等)


2. Taqman探針法

實驗周期:1個月左右

交付標準:拷貝數(絕對定量)、擴增曲線、標準曲線(絕對定量)、樣品統計分析、探針及其序列實驗報告(實驗步驟、試劑、儀器、原始數據等)

 

需確認的信息

1. 目的基因及種屬

2. 樣本種屬及類型(組織、細胞、血清等)

3. 樣本數量

4. 是否提供引物

5. 數據統計與分析要求


圖片1.png

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