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RNAi

實驗意義

1. 可應用于闡明基因組結構與功能以及基因之間相互作用的科學,對于探索基因在生命活動中的作用及其機制具有重要意義。

2. 能夠為一些疾病提供新的診斷方法和治療方法,可有助于醫生獲得更多治療信息并進行個性化精準醫療。


實驗原理及步驟

1. siRNA的設計和選擇:根據研究目的選擇合適的數據庫及軟件篩選靶序列的siRNA,通常需要設計多個siRNA,找到最優最有效的siRNA序列;

2. siRNA的制備:常用的體外制備方法有化學合成、體外轉錄、長片段dsRNA經RNase III類降解,以及通過siRNA表達質粒載體或者病毒載體以及PCR制備的siRNA表達框架(siRNA expression cassettes, SECs)在細胞中表達制備siRNA;

3. siRNA的轉染:siRNA、siRNA表達載體或者siRNA表達框架轉染進入細胞的方法主要有磷酸鈣共沉淀轉染、電穿孔轉染、機械法(顯微注射和基因槍)、陽離子脂質體試劑轉染;

4. 檢測靶基因的表達:WB等方法檢測靶基因的表達或者可以通過標記siRNA(如熒光標記)分析其表達,還可用作siRNA胞內定位和雙標記實驗來追蹤轉染過程以及靶基因表達沉默過程。


結果展示

RNAi.png



實驗周期及交付標準

1. 實驗周期:2-4周

2. 交付標準:質粒、片段驗證結果、實驗報告(實驗步驟、試劑、儀器等)


需確認的信息

1. 基因的種屬及ID號

2. 基因序列

圖片1.png

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